- - Dal primo si evince che il vorinostat non ha fatto nulla di buono nella riattivazione del virus latente, mentre ha causato cambiamenti potenzialmente dannosi a livello immunologico. La conclusione è che Lewin pare disposta ad abbandonare questo HDACi in favore di "sostanze di riattivazione della latenza più potenti e verosimilmente da usarsi in combinazione con sostanze immuno-modulanti, che stimolino l'immunità specifica".
- Dal secondo poster si evince che la costruzione di due modelli che descrivono la dinamica del virus in cellule latentemente infette dopo somministrazione di vorinostat (un modello in cui si usa un singolo tipo di cellule latentemente infette e uno più complesso, in cui se ne usano due e il processo di riattivazione delle cellule quiescenti è più lento col risultato di corrispondere meglio ai dati raccolti direttamente dai pazienti durante la sperimentazione dei 14 giorni, 400 mg/giorno) porta Lewin a concludere che il trattamento di vorinostat + ART può arrivare a ridurre la dimensione del reservoir latente, perché c'è la possibilità - adombrata dal secondo modello - che esista una sottopopolazione di cellule "latenti in modo più profondo", in cui il virus potrebbe essere riattivato *se si insistesse un po'*.
Due giorni fa è uscito su PLoS ONE un articolo, che mi pare istruttivo da molti punti di vista - non ultimo il fatto che a firmarlo è anche Daria Hazuda, Merck (produttore del vorinostat): Effects of Treatment with Suppressive Combination Antiretroviral Drug Therapy and the Histone Deacetylase Inhibitor Suberoylanilide Hydroxamic Acid; (SAHA) on SIV-Infected Chinese Rhesus Macaques.
Ora, tralasciamo il fatto che l'obiettivo principale era quello di costruire un modello animale (macachi rhesus) di ottimo controllo del virus (SIVmac251) mediante cART (tenofovir/emtricitabina + un inibitore dell'integrasi che si chiama L-870812 + darunavir/r aggiunti in un secondo momento).
Vediamo invece come è andata quando il vorinostat è stato somministrato per 3 settimane in una situazione di SIV RNA stabilmente sotto le 30 copie/mL (salvo sporadici blip):
- il SAHA è stato ben tollerato, ma non ha causato cambiamenti nei parametri del virus nel plasma o associato alle cellule che si potessero dimostrare associati al trattamento.
E dunque, una volta di più, il vorinostat non ha fatto quel che si sperava facesse.
Peccato che la conclusione sia piuttosto inquietante, perché gli autori ritengono che questo ennesimo fallimento del vorinostat possa essere dipeso dal dosaggio, dai campioni o da qualche limitazione dei test.
Ma costoro hanno lavorato su scimmie, che al termine delle tre settimane di vorinostat hanno sacrificato. Si può pensare di giocare con le dosi anche se si trattano esseri umani?
E lo si può fare dopo quel che ci ha insegnato il lavoro di John Tilton, Mark Lucera e colleghi della Case Western Reserve University sui rischi dei dosaggi vicini ai 400 mg nel promuovere la replicazione dell'HIV e la suscettibilità dei CD4 ad essere infettati?
DdD: alla luce di questa massa crescente di risultati che vanno tutti nella medesima direzione, non sarebbe più onesto, saggio e pure produttivo mollare finalmente il colpo?
Gli abstract sul vorinostat ad AIDS 2014:
Multidose vorinostat in HIV-infected individuals on effective ART leads to an increase in regulatory T cells but no change in inducible virus or HIV-specific T cells
F. Wightman1,2, J.H. Elliot1,2,3, A.E. Solomon1,2, R. Fromentin4, F.A. Procopio4, J. Zeidan4, T. Spelman2, N. Chomont4, P.U. Cameron1,2,3, R.P. Sekaly4, S.R. Lewin1,2,3
1Monash University, Infectious Diseases, Melbourne, Australia, 2Burnet Insitute, Centre for Biomedical Research, Melbourne, Australia, 3Alfred Hospital, Infectious Diseases Unit, Melbourne, Australia, 4VGTI Florida, Port St Lucie, United States
Background: Histone deacetylase inhibitors (HDACi) activate HIV transcription in latently infected T-cells in vitro and in HIV infected subjects on suppressive antiretroviral therapy (ART). HDACi have also been reported to have widespread largely suppressive effects on both the innate and adaptive immune response. This study aimed to examine whether administration of 14 days of vorinostat to HIV-infected patients on ART led to a change in inducible virus or adaptive immune response.
Methods: Vorinostat 400mg orally was given daily for 14 days to 20 HIV-infected individuals on ART. Staphylococcal enterotoxin B(SEB) and HIV-gag specific T-cells were measured using intracellular cytokine staining for interleukin(IL)-2, tumor necrosis factor(TNF)-α and interferon(IFN) γ (n=17). Intracellular FoxP3 staining was used to determine percentage of regulatory T-cells (Treg). Integrated HIV-DNA in CD4 T-cells was quantified by nested real time PCR at days 0, 14 and 84. Inducible reservoir was quantified by tat-rev inducible limiting dilution assay (TILDA) in CD4 T-cells stimulated with phorbol myristate acetate (PMA) and ionomycin prior to and following vorinsotat. The frequency of positive cells detected by qPCR for tat-rev multiply spliced (MS)-RNA was calculated using the maximum likelihood method. Significant changes over time were determined by generalised estimating equation (GEE).
Results: There was a significant increase in CD4+ Treg cell at day 14 (p=0.046) which returned to baseline by day 84. SEB-specific CD8 T-cells that produced IFN-γ also increased significantly during and following vorinostat (p=0.026) while there were no significant changes in other SEB-specific CD8+ T-cells and all SEB-specific CD4+ T-cells. There were no significant changes in gag-specific CD4 or CD8 T-cells. We saw no significant change in integrated DNA (n=11) or the frequency of CD4+ T-cells that produced msHIV RNA following mitogen stimulation measured by TILDA (n=7) compared to baseline indicating no change in inducible virus from the latent reservoir following vorinostat.
Conclusions: Administration of vorinostat to HIV-infected patients on ART led to significant potentially adverse immunological changes including an increase in T-regs without any significant change in HIV-specific T-cells. Future strategies to reduce the latent reservoir will require more potent latency reactivating agents and likely combination with immune modulators that boost HIV-specific immunity.
Modeling the effects of vorinostat in vivo on activation of latent HIV-infection
S. Lewin1,2,3, K. Ruian4, J. Elliott1,2,5, A. Perelson4
1Alfred Hospital, Department of Infectious Diseases, Melbourne, Australia, 2Monash University, Department of Infectious Diseases, Melbourne, Australia, 3Burnet Institute, Centre for Biomedical Research, Melbourne, Australia, 4Los Alamos National Laboratory, Theoretical Biology and Biophysics Group, Los Alamos, United States, 5Burnet Institute, Centre for International Health, Melbourne, Australia
Background: Long lived latently infected resting memory T-cells that persist in HIV-infected patients on combination antiretroviral therapy (ART) are the major barrier to cure . Activation of latent infection may be a potential strategy to eliminate these long lived cells. The histone deacetylase inhibitor (HDACi), vorinostat, has been shown to activate transcription of HIV RNA in latently infected cells in vitro and in vivo. We recently demonstrated that vorinostat given once daily for 14 days to HIV-infected patients on ART, induced a significant and sustained increases in cell associated unspliced (CA-US) HIV RNA in the majority of patients, however, there was no change in HIV DNA . The goal of this study was to develop a mathematical model that could accurately fit the change in CA-US HIV RNA following vorinostat.
Methods: HIV-infected adults on suppressive cART (n=20) were enrolled in a prospective single arm study and received vorinostat 400 mg once daily for 14 days. Blood was collected at 0, 2, 8 and 24 hours, and 7, 14, 21, 28 and 84 days. CA-US HIV RNA was quantified in CD4+ T-cells from blood.
Results: We constructed viral dynamic models that included latently infected cells and incorporated the effects of vorinostat treatment. We developed two models - one that assumed a single type of latently infected cell (model A) and a second model (model B) by adding another type of latently infected cell that was activated more slowly than the cells in model A. The model with two latently infected cell populations, one that was rapidly-reactivated (within one day of treatment) and one that was slowly-reactivated upon treatment, fit the data better than a model with a single latently infected cell population. Fitting the model to changes in CA-HIV RNA further suggested that vorinostat treatment (in conjunction with cART) may also reduce the size of the latent reservoir.
Conclusions: The variable kinetic changes in CA-US HIV RNA following vorinostat may potentially be explained by two populations of latently infected cells, which may reflect a ''deeply latent'' cell subpopulation in the reservoir.